二氧化碳培養(yǎng)箱用途廣泛，主要用來培養(yǎng)細胞、組織和某些特殊微生物，為它們提供一個良好的體外環(huán)境，廣泛應用于細胞學實驗、微生物學實驗、組織學實驗以及分子生物學實驗。因此，二氧化碳培養(yǎng)箱的消毒和維護尤為重要。

二氧化碳培養(yǎng)箱的常見污染

　　混入二氧化碳培養(yǎng)箱(細胞培養(yǎng)環(huán)境)中，對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應視為污染。不同的污染物對細胞的影響也有差別，有的影響是長期、緩慢和潛在的，而有的則能在很短的時間內(nèi)YZ細胞生長或產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺害細胞。根據(jù)污染源不同主要可以分為：生物性污染、化學性污染、物理性污染和氣溶膠污染。

　　1、生物性污染：

　　這是Z常見也是危害Zda的污染。如細菌、病毒、真菌，支原體等。這些污染源有可能是人為帶入，或是細胞在放入二氧化碳培養(yǎng)箱前已經(jīng)受污染，再或者是箱體本身沒有消毒干凈。體外培養(yǎng)的細胞自身沒有抵抗污染的能力，而培養(yǎng)基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的，因而細胞微生物污染一旦發(fā)生往往是無法挽救的。

　　2、化學性污染：

　　二氧化碳培養(yǎng)箱中許多化學物質(zhì)都可以引起細胞污染。如細胞培養(yǎng)容器清洗過程中殘留的洗滌劑、加濕器中未純化的水、人為帶入的液體或氣體都可能成為化學性污染的來源。不同化學物質(zhì)對細胞污染是不一樣的，有的可能促進或YZ細胞生長，有的甚至殺死細胞。

　　3、物理性污染：

　　培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素，如溫度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細胞產(chǎn)生影響。物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學性污染，其主要是在代謝水平或分子水平上，影響細胞正常的生理過程。

　　4、氣溶膠污染：

　　氣溶膠是液體或固體微粒均勻地懸浮在氣體介質(zhì)中的分散體系，當微粒是微生物時，就是微生物氣溶膠，如果這種微生物是病原性的，就是病原微生物氣溶膠。細菌、病毒等病原體通過氣溶膠可在人與人、人與環(huán)境之間傳播。

二氧化碳培養(yǎng)箱污染防控措施

　　1、二氧化碳培養(yǎng)箱的選擇：

　　二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們設計了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生，其主要是防污染設計和消毒滅菌系統(tǒng)的改進，以達到消毒滅菌的目的。如帶有紫外消毒功能的二氧化碳培養(yǎng)箱、帶HEPA過濾器的二氧化碳培養(yǎng)箱，以及帶高溫消毒的二氧化碳培養(yǎng)箱等，后者又分為高溫干熱和高溫濕熱兩類。這些裝置的滅菌能力各有千秋，紫外燈消毒范圍有限，距離燈越遠，消毒能力越差。

　　HEPA過濾器的過濾膜孔徑有限，無法去除病毒和一些微小細菌，并且容易損耗，也有其局限性。相比而言，高溫消毒則是比較有效的方法。而高溫干熱和高溫濕熱也有所不同，由于蒸汽潛熱大、穿透力強，容易使蛋白質(zhì)變性或凝固，因此高溫濕熱的滅菌效率比干熱滅菌法高。

　　2、提高素質(zhì)：

　　人為因素和態(tài)度可以對環(huán)境、人和物起到一個正面或負面的影響。以安全為目的，實驗室內(nèi)的工作人員應明白自身的態(tài)度和人為因素對實驗環(huán)境的重要性。因此，對實驗室工作人員進行專業(yè)培

　　3、重視管理：

　　細胞室內(nèi)的二氧化碳培養(yǎng)箱應由專人負責管理，定期對系統(tǒng)進行校正，至少每年一次。各項數(shù)值一旦固定后，不要隨意調(diào)節(jié)，以免影響箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度的波動，降低機器的靈敏度，同時還會影響二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)的細胞生產(chǎn)狀態(tài)。

　　使用前，對二氧化碳培養(yǎng)箱的各項指標進行系統(tǒng)校正，并且對箱體和內(nèi)部進行消毒處理，等各項數(shù)值穩(wěn)定一段時間后方可使用。一旦出現(xiàn)緊急問題，應及時上報，應由專業(yè)的人員進行操作，馬上采取應對措施，以免造成不必要的損失。

　　4、規(guī)范操作：

　　二氧化碳培養(yǎng)箱的使用雖然很簡單，但同樣需要規(guī)范操作。進細胞室必須穿著實驗服(白大褂)，換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實驗操作時必須帶一次性手套，特別是打開二氧化碳培養(yǎng)箱前，必須先用75%的酒精噴壺噴洗雙手再開二氧化碳培養(yǎng)箱，再取出細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后，再放回二氧化碳培養(yǎng)箱時，同樣也要噴酒精消毒。

　　二氧化碳培養(yǎng)箱的兩個門開關取(放)物要迅速，不可長時間開著，否則會影響CO2的濃度、溫度和濕度，以及造成污染。尤其是不要忘了關好里層的玻璃門。切記開門時不要對著二氧化碳培養(yǎng)箱說活，大口呼吸甚至是打噴嚏。

　　5、加強防護：

　　如果實驗人員生病而攜帶病菌，應帶上口罩再進細胞室，病情嚴重的則不宜進行實驗。女性同志實驗時頭發(fā)應梳起，防止皮屑污染及連帶事件的發(fā)生。如果實驗室條件允許，可以每人佩戴實驗帽、手套和口罩，以防污染二氧化碳培養(yǎng)箱及對實驗人員的自身的防護。

　　6、注重保養(yǎng)：

　　二氧化碳培養(yǎng)箱置于細胞室中，室內(nèi)需保持干燥，環(huán)境溫度不能超過30℃(建議：18℃-30℃)。二氧化碳培養(yǎng)箱放置在遠離門窗、供暖設備和空調(diào)導管的地方，不能被陽光直接照射。二氧化碳培養(yǎng)箱的放置臺面必須水平避震且非易燃材質(zhì)，不能靠在墻壁或類似的建筑物上，其后部接電處和墻壁至少保留30cm的空間。一旦放好不宜再移動。

　　7、校正處理：

　　二氧化碳培養(yǎng)箱在放好后，再對箱體和內(nèi)部進行消毒處理，并且對各項指標進行系統(tǒng)校正，等各項數(shù)值穩(wěn)定一段時間后方可使用。因CO2氣體對于健康是有害的，因此細胞室需安裝足夠的通風裝置?？諝庵械姆蹓m氣溶膠易造成二氧化碳培養(yǎng)箱的污染，需要一個流通的空氣環(huán)境。將二氧化碳培養(yǎng)箱的管理任務分派給有經(jīng)驗的檢查人員是十分重要的。如長期不使用二氧化碳時，應將CO2開關關閉，防止CO2調(diào)節(jié)器失靈。

二氧化碳培養(yǎng)箱清潔、消毒、滅菌處理

　　1、二氧化碳培養(yǎng)箱的清潔

　　清潔是指去除灰塵、污垢和有機污漬。清潔方法包括刷、吸、干擦、洗滌或用浸泡肥皂水或清潔劑的濕布拖擦。粉塵、污物以及有機物是微生物的棲身之所，并可能影響除污染劑(KJ劑、化學殺菌劑以及消毒劑)的作用。

　　二氧化碳培養(yǎng)箱必須先經(jīng)過清潔才能實現(xiàn)消毒和滅菌的目的，許多殺菌劑只對經(jīng)過清潔過的物品才具有殺菌活性。清潔時必須使用與以后使用的消毒劑或殺菌劑化學性質(zhì)上相容的試劑進行清潔、消毒。

　　①清潔箱體表面：先拂去表面的灰塵，再用濕的海綿或軟布清洗，再用軟布擦干。如果有污物則用低濃度的清潔劑清洗，然后擦干。

　　②清洗箱體內(nèi)部：選擇合適的消毒劑。所有的物件和表面必須徹底清洗，然后用無菌水沖洗，再擦干或晾干。

　　③清洗玻璃門：清洗箱內(nèi)的玻璃門時使用的清潔劑和清洗培養(yǎng)箱內(nèi)部時使用的相同。然后用蒸餾水漂洗，從而清除殘留的清潔劑，Z后用軟布把門擦干。

　　2、二氧化碳培養(yǎng)箱的消毒和滅菌

　　消毒是指殺死微生物的物理或化學手段，但不一定殺死其孢子。滅菌是指殺死所有微生物，當二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)細胞受到污染時則需要采取滅菌措施。一般，在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)細胞沒有污染的情況下平均1-3個月徹底消毒一次。Z常用的3種消毒滅菌的方式是：液體消毒劑、紫外和加熱。

　　①液體消毒劑：選擇對二氧化碳培養(yǎng)箱無腐蝕性的液體消毒劑，并且液體消毒劑的消毒效果好壞和很多因素有關。比如：場所的溫度、接觸時間、pH、穿透能力、有機物的反應。這些因素中的一些很小的變化可能會造成去污劑的效力上大的不同。因此甚至在很有利的情況下，當Z終要求必須無菌時，液體去污劑也不是完全可信賴的去污方法。

　　②紫外消毒：一般先用蒸餾水清洗干凈后，再用紫外燈照射(帶紫外燈的二氧化碳培養(yǎng)箱)一天或者用手提式的紫外燈照射。

　　③加熱：濕熱和干熱被認為是殺菌Z有效的方法。在一般環(huán)境下，高壓滅菌器加熱到121℃快速產(chǎn)生蒸汽是Z方便的方法。干熱160℃-170℃，2-4小時在不具有滲透性、非有機體的物質(zhì)(如玻璃)是可行的凈化方法，但是甚至在有機體或非有機體的淺層也不能被絕緣。

　　除了以上幾種方法外，還可以采用聯(lián)合殺菌的方法，幾種消毒滅菌的方法同時使用來達到徹底清潔的效果。