分子雜交（molecular hybridization）是指使單鏈核酸堿基序列確定的技術(shù)。待測(cè)單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過(guò)堿基配對(duì)使可檢出的雙螺旋片段形成為分子雜交的基本原理。下面就讓小編帶你了解一下Southern雜交方法。

流程

制備待測(cè)核酸樣品

1.將細(xì)胞破碎或者裂解

2.對(duì)基因組DNA進(jìn)行抽取純化

3.利用限制酶將DNA消解為大小不一的DNA片段

電泳分離待測(cè)DNA樣品

能夠通過(guò)核素標(biāo)記所用的分子量標(biāo)準(zhǔn)，雜交后的標(biāo)準(zhǔn)分子量DNA亦可以顯影出條帶

凝膠中核酸變性

如果DNA片段的分子量高于10kb，那么需要的轉(zhuǎn)移時(shí)間將會(huì)很長(zhǎng)。因此，必須控制DNA片段的Z長(zhǎng)長(zhǎng)度小于2kb。

若靶序列在5kb以上，那么需要進(jìn)行脫嘌呤處理。

脫嘌呤處理步驟：

在0.25mol/L HCl中浸沒(méi)入凝膠，在室溫環(huán)境下輕微地?fù)u晃，一直到溴酚藍(lán)的顏色變?yōu)辄S色為止。然后再將凝膠在滅菌雙蒸水中浸沒(méi)。

若靶序列在5kb以下，那么直接進(jìn)行如下步驟

1.在變性液中浸沒(méi)凝膠，在室溫環(huán)境下30min，輕微地?fù)u晃，再將凝膠在滅菌雙蒸水中浸沒(méi)，在中和液中浸沒(méi)凝膠，在室溫環(huán)境下30min，Z后在20?SSC中使凝膠平衡不少于10min。

Southern印跡

在高鹽條件下，利用毛吸作用使得凝膠中的DNA向硝酸纖維素濾膜轉(zhuǎn)移，在烘干固定之后就能夠用來(lái)雜交，該方法是Southern發(fā)明，所以，又被叫做Southern印跡。

轉(zhuǎn)移方法：

1.電轉(zhuǎn)法

2.真空轉(zhuǎn)移法

3.毛細(xì)管虹吸印跡法