多肽固相合成技術的發(fā)明同時促進了多肽合成的自動化。世界上diyi臺真正意義上的多肽合成儀出現(xiàn)在1980年代初期。雖然在各項功能方面有著明顯的缺陷,但是它畢竟把人從實驗室里解放出來,極大地提高了工作效率。
隨著多肽科學的發(fā)展,科學家也對合成儀提出了更高的要求,從而帶動了多肽合成儀的發(fā)展。目前多肽合成儀品種繁多。從合成量上分,可分為微克級的,毫克級的,克級的和公斤級的;從功能上分,可分為研究型的,小試型的,中試型的,普通生產(chǎn)型的和GMP生產(chǎn)型的;從自動化程度上分,可分為全自動的,半自動的和手動的;從通道上分,可分為單通道的和多通道的;從技術角度上分,可分為diyi代的,第二代的,和第三代的。
diyi代多肽合成儀:
標志性特點是采用氮氣鼓泡的攪拌原理來對反應物進行攪拌,即多肽合成儀上反應器是固定的,氮氣從反應器的下方通過反應器到上部排出,在這一過程中產(chǎn)生的汽泡把固相和液相混合起來。
這樣設計多肽合成儀的好處是結構簡單,成本低,但各項功能方面有著明顯的缺陷,目前采用氮氣鼓泡方式的diyi代多肽合成儀已大部分退出了市場。

第二代多肽合成儀:
標志性特點是用不完全性的機械攪拌來取代氮氣鼓泡,一般可分為接觸式攪拌與非接觸式攪拌兩種。
接觸式攪拌常見的攪拌方式是伸入反應器內(nèi)部的螺旋槳由上部的電機帶動進行快速旋轉,使反應器內(nèi)部的固液兩相進行混合。但攪拌方式帶來的不利因素如清洗障礙,合成量低,反應死角等也不容忽視,目前全世界共大多數(shù)多肽合成儀生產(chǎn)廠商放棄了接觸式攪拌方法。
機械性非接觸式攪拌的主要原理是反應器在直立下圍繞原點作左右擺動,或者圓周運動。這種由反應器本身的運動而帶動里面固液兩相混合的方法克服了接觸式攪拌帶來的缺點,合成產(chǎn)量和純度也明顯好于用氮氣鼓泡的diyi代合成儀。所以機械性非接觸式攪拌成為了多肽合成儀的主流。但是由于這種攪拌方法不能真正消除反應死角,所以科學家們并沒有滿足而停下他們追求wan美的腳步。
第三代多肽合成儀:
其反應器轉動方式有別于前兩代的多肽合成儀,即反應器上方相對固定,而下方作圓周360度快速旋轉,帶動反應器里的固液兩相從底部向上作螺旋運動,一直達到反應器的Z上方,真正做到了無死角。
無死角多肽合成儀的另一種方式是反應器在數(shù)控馬達的帶動下作上下180度的翻轉運動。固相和液相在運動過程中不斷從反應器的一端到達另一端再返回來。一般用這種儀器合成出來的肽純度是Zgao的,且適合于擴大生產(chǎn)。
多肽合成儀的特點:
多肽固相合成法是多肽合成化學的一個重大的突破。它的Zda特點是不必純化中間產(chǎn)物,合成過程可以連續(xù)進行,從而為多肽合成的自動化奠定了基礎。目前的多肽合成儀,基本都是用的固相合成原理。
多肽合成儀的合成過程:
基于Fmoc化學合成,先將所要合成的目標多肽的C-端氨基酸的羧基以共價鍵形式與一個不溶性的高分子樹脂相連,然后以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點,同期它的氨基酸的羧基(已經(jīng)活化)作用形成肽鍵,不斷重復這一過程,即可得到目標多肽。根據(jù)多肽的氨基酸組成不同,多肽后處理方式不同,純化方式也有差異。

多肽合成儀的常用載體:
多肽分子量很小,免疫應答效果差,需要與載體偶連以提高免疫源性。載體大多數(shù)為高分量的蛋白質(zhì),常用的載體有KLH(銅藍蛋白),BSA,OVA等。KLH為shou選。ELISA測定多肽抗體效價時,有些多肽直接包板有困難,需要與BSA等偶連后再包板。
合成多肽如何存儲:
多肽是粉末狀,一般為灰白色,組成不同,多肽粉末的顏色有差異。多肽一般需要避光保存。長期保存應保存在-20度,短期可以保存在4度??梢远虝r間室溫運輸。
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