核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動(dòng)完成的儀器。其在環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢測(cè)、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究以及畜牧業(yè)等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。下面就讓小編帶你了解一下DNA提取的常見問題。

常用方法

1.為什么要用pH8的Tris水溶液飽和酚？呈粉紅色的酚可否使用？如何保存酚不被空氣氧化？

由于酚與水有一定的互溶，抽提DNA過程中，不會(huì)造成樣品中含有DNA的水分被吸收，使得DNA的損失減少為苯酚用水飽和的目的。使用Tris將pH調(diào)節(jié)為8，是由于在此條件下，DNA比較穩(wěn)定。在中性或堿性條件下（pH5~7），和DNA相比較，RNA游離到水相更加的容易，因此能夠使RNA含量較少的DNA樣品獲得。在冰箱中保存的酚，容易被空氣氧化而變成粉紅色的，DNA容易受到這樣的酚的作用而降解。為了使酚的氧化diyi避免，能夠?qū)⑹杌掖己?-羥基喹琳加入直到至終濃度為0.1%。8-羥基喹琳是固體粉末，帶有淡黃色，不但可以氧化，還能夠在一定程度上對(duì)DNase的活性起到Y(jié)Z作用，其為金屬離子的弱螯合劑。使用TrispH8.0水溶液飽和后的酚，Z好在棕色小試劑瓶里分裝，將一層Tris水溶液或TE緩沖液在上面蓋上，使空氣隔絕，將其裝滿蓋緊蓋子Z好。若有可能，能夠?qū)⒌獨(dú)獬淙耄古c空氣接觸而被氧化得以避免。平時(shí)在4℃或-20℃冰箱中保存，使用時(shí)，將蓋子打開吸取后將蓋子迅速蓋上，如此能夠使酚可用數(shù)月不變質(zhì)。

2.為什么用酚與氯仿抽提DNA時(shí)，還要加少量的異戊酵？

在抽提DNA時(shí)，為了混合均勻，必須將容器劇烈振蕩數(shù)次，在這個(gè)時(shí)候，在混合液內(nèi)容易有氣泡產(chǎn)生，氣泡會(huì)對(duì)相互間的充分作用起到阻止功能。將異戊醇加入可以使分子表面張力降低，因此，能夠使得抽提過程中的泡沫產(chǎn)生減少。通常氯仿與異戊酵的采用比例為24：1。同時(shí)異戊醇對(duì)分相很有幫助，可以維持離心后的上層水相，中層變性蛋白相以及下層有機(jī)溶劑相穩(wěn)定。

3.抽提DNA去除蛋白質(zhì)時(shí)，怎樣使用酚與氯仿較好？

水是極性分子，酞與氯仿是非極性分子，當(dāng)?shù)鞍姿芤号c酚或氯仿混合時(shí)，酚或氯仿就會(huì)擠去蛋白質(zhì)分子之間的水分子，使蛋白失去水合狀態(tài)而變性。變性蛋白質(zhì)的密度經(jīng)過離心以后大于水的密度，所以和水相分離，在水相下面沉淀，從而和在水相中溶解的DNA分開。而而酚與氯仿有機(jī)溶劑有著更大的比重，在Z下層保留。作為表面變性的酚與氯仿，對(duì)于蛋白質(zhì)的去除，各有利弊，酚的變性作用更大，然而酚與水相有一定程度的互溶，在酚相中大約溶解0%~15%的水，所以使得這部分水相中的DNA損失了，然而氯仿沒有如酚一般好的變性作用，然而氯仿與水不相混溶，，不會(huì)將DNA帶走。因此在抽提過程中，想要達(dá)到Z好的效果，應(yīng)當(dāng)混合使用酚與氯。經(jīng)酚diyi次抽提后有酚殘留在水相中，因?yàn)榉优c氯仿是互溶的，能夠使用氯仿對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行第二次變性，在這個(gè)時(shí)候，能夠帶走酚。也能夠在第二次抽提時(shí)將酚與氯仿以1：1的比例混合使用。