手工測序以及自動測序均屬于DNA序列測定，手工測序可分為maxam-gilbert化學(xué)降解法與sanger雙脫氧鏈終止法，事實(shí)上，目前dna序列分析的主流是自動測序。373型、377型、310型、3700和3100型等多種型號DNA測序儀均已經(jīng)被美國pe abi公司生產(chǎn)出來了，在這幾款DNA測序儀中，臨床檢測實(shí)驗(yàn)室使用Z多的一種型號要屬310型。

鳥槍法

“鳥槍法”指的是一種目的基因通過生物基因組進(jìn)行提取的方法。

這種方法也就是應(yīng)用基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)對目的基因分離的目的，將直接分離基因的難關(guān)繞過，目的基因在基因組DNA文庫中篩選出是其特點(diǎn)。也可以說這就是對“溜散彈射擊”原理的利用來對某個基因進(jìn)行“命中”，因?yàn)樵谡麄€基因組中目的基太少太小，相當(dāng)程度上必須“碰運(yùn)氣”因此，這個方法有叫做“散彈槍”實(shí)驗(yàn)法或者“鳥槍法”。

首先生物細(xì)胞染色體DNA在酶化學(xué)方法(如限制性內(nèi)切核酸酶)或者物理方法(如剪切力、超聲波等)的作用下被切割，獲得基因水平的許多片段，然后結(jié)合這些片段與適當(dāng)?shù)妮d體，在受體菌中轉(zhuǎn)入重組DNA擴(kuò)增，使無性繁殖的基因文庫獲得，再和篩選方法相結(jié)合，將含有某一基因的菌株從眾多的轉(zhuǎn)化子菌株中選出，從中分離、回收重組的DNA。

21世紀(jì)di一個十年里，DNA測序與生物云計算、個性化分子診斷、基因芯片、人類基因組計劃等等吸引無數(shù)眼球的熱門詞匯息息相關(guān)。在創(chuàng)意新天地里，生物技術(shù)和信息技術(shù)相互融合，相互作用，相互影響。

該儀器的應(yīng)用相當(dāng)?shù)貜V泛，能夠進(jìn)行進(jìn)行dna測序、雜合子分析、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(sscp)、微衛(wèi)星序列分析、長片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析，臨床上不但能夠進(jìn)行常規(guī)dna測序，而且還能夠進(jìn)行法醫(yī)學(xué)上的親子和個體鑒定、微生物與病毒的分型與鑒定、基因突變檢測、hla配型、單核苷酸多態(tài)性(snp)分析等。該儀器之所以有如此多的用途是因?yàn)樵搩x器具有dna測序，pcr片段大小分析和定量分析等功能。

步驟

1.目的片段的大片段InsertDNA使用限制酶切下，并用凝膠電泳進(jìn)行回收。

2.用物理方法（如超聲波等）切斷處理回收的大片段DNA，用T4DNAPolymerase末端平滑化小片段DNA。

3.進(jìn)行電泳，切膠將1kbp～2kbp的小片段DNA回收，之后將一個A堿基在DNA的3'端用BcaBestDNAPolymerase加上。

4.在T-Vector中連入加上A-tail的DNA片段，然后轉(zhuǎn)化，對克隆進(jìn)行挑選。

5.DNA測序陽性克。。

6.編輯數(shù)據(jù)，Z后使一條大片段的DNA序列連成。