分子雜交（molecular hybridization）是指使單鏈核酸堿基序列確定的技術(shù)。待測(cè)單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過(guò)堿基配對(duì)使可檢出的雙螺旋片段形成為分子雜交的基本原理。下面就讓小編帶你了解一下寡核苷酸探針的使用方法。

概念

靶基因上單個(gè)核苷酸的點(diǎn)突變能夠通過(guò)寡核苷酸探針來(lái)檢測(cè)到。

寡核苷酸探針?lè)N類(lèi)

單一已知序列的寡核苷酸探針和許多簡(jiǎn)并性寡核苷酸探針組成的寡核苷酸探針庫(kù)為兩種主要常用的寡核苷酸探針。

1.許多簡(jiǎn)并性寡核苷酸探針組成的寡核苷酸探針庫(kù)

2.單一已知序列的寡核苷酸探針

單一已知序列寡核苷酸探針可以配對(duì)它們的目的序列，能夠?qū)㈦s交條件準(zhǔn)確地設(shè)計(jì)出來(lái)，使探針不和序列相近的非完全配對(duì)序列雜交，僅和目的序列雜交，對(duì)于一些未知序列的目的片段則沒(méi)有效果得到保障。

注意事項(xiàng)

1.這種方法是多加一個(gè)磷酸在每個(gè)探針的5'末端，從理論層面來(lái)說(shuō)，這會(huì)對(duì)于其與DNA的雜交產(chǎn)生影響。所以，高放射性的寡核苷酸探針能夠通過(guò)使用Klenow DNA聚合酶的鏈延伸法獲得。

2.不僅有通常使用的同位素標(biāo)記探針，也可以使用非同位素標(biāo)記探針。

操作準(zhǔn)備：

試劑：T4多核苷酸激酶，[γ-32 P] ATP以及10×T4多核苷酸激酶緩沖液。

設(shè)備：恒溫水浴鍋，高速離式離心機(jī)等。

材料：待標(biāo)記的寡核苷酸。

操作步驟：

1.在30ml水中溶100ng寡核苷酸，將溶液加熱到65℃變性5min，再快速地在冰溶中將其放置。然后立刻將2mlT4多核苷酸激酶，10ml[g-32P]ATP以及5ml10×激酶緩沖液加入到溶液中加水變成50ml的溶液混合均勻后放置于37℃水浴中水浴20min。之后再將20單位T4多核苷酸激酶加入，放置于37℃水浴中水浴20min之后馬上放入冰浴中。Z后使用Sephadex G-50柱層析。