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基因槍如何操作

更新時間:2025-10-22 17:53:34 類型: 閱讀量:1624
導(dǎo)讀:基因槍技術(shù)又叫做微粒轟擊技術(shù)或者生物彈道技術(shù),是通過高壓氣體加速或者火藥爆炸直接往完整的組織或者細胞中送入包裹了DNA的球狀金粉或者鎢粉顆粒的一種技術(shù)。

基因槍技術(shù)又叫做微粒轟擊技術(shù)或者生物彈道技術(shù),是通過高壓氣體加速或者huo藥爆炸直接往完整的組織或者細胞中送入包裹了DNA的球狀金粉或者鎢粉顆粒的一種技術(shù)。


基因槍的操作方法

準備材料

將一薄層培養(yǎng)基鋪在9cm培養(yǎng)皿上,在培養(yǎng)皿ZX平鋪材料,直徑在3cm范圍內(nèi)。


處理金粉

在離心管中放置60mg金粉或鎢粉,將無水乙醇1m1加入,經(jīng)過3min的充分振蕩,以9615g離心1rain,去上清再將無菌水1m1加入,混勻充分之后,以9615g離心,將以上步驟重復(fù)三次。Z后在1m1無菌蒸餾水中懸浮金粉,儲存在室溫下或者4攝氏度下。


處理DNA

將50tA金粉懸浮液去除,再將5rd的質(zhì)粒DNA溶液、亞精胺依次加入,經(jīng)過3rain的振蕩,放置在室溫下10min,以9615g離心10s,棄上清,將無水乙醇250l加入,振蕩后以9615g離心10s,棄上清。沉淀重新在水乙醇中懸浮。


1.jpg


操作基因槍

在無菌條件下進行基因槍的所有操作,步驟如下:

1、基因槍表面及樣品室使用70%乙醇進行消毒。固定工具、微彈載體及其固定器、阻擋網(wǎng)和可裂圓片使用70%乙醇浸泡15min后,然后放在超凈臺上晾干。使用70%乙醇對可裂膜片、固定蓋、微彈載體發(fā)射裝置的表面進行滅菌,吹干。


2、在固定環(huán)中嵌入微粒載片,在微粒載片ZX加入DNA及金粉的混合物,干燥大約1min。


3、在其托座上安裝可裂膜,順時針擰到氣體加速器上。


4、安裝好固定環(huán)(帶有微粒的面朝下)、微粒載片、阻擋網(wǎng)托座、阻擋網(wǎng)、和空間環(huán),將蓋子旋緊,在槍入插入。


5、在轟擊室中放入樣品,將門關(guān)好。


6、將氦氣瓶的總閥打開,順時針轉(zhuǎn)氦氣調(diào)節(jié)閥,使得氦壓表指針的示數(shù)超過可裂膜壓力。


7、將基因槍及變壓器開關(guān)打開。


8、將真空鍵按動,當真空度至26-28inHg=88.05~94.82kPa時,將Hod鍵迅速按下,接著將發(fā)射鍵(fire)按住,并保持不動,直到激發(fā)為止,接著將發(fā)射鍵關(guān)掉,再將Ho1d鍵關(guān)掉。


9、將通氣鍵按住,直到歸零真空表,然后將樣品取出。


10、關(guān)機。旋緊氦氣瓶的總開關(guān),打一次空槍,歸零氦壓表指針以后,再將氦壓表調(diào)節(jié)閥逆時針旋轉(zhuǎn),將基因槍的總開關(guān)及變壓器開關(guān)關(guān)閉。


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