液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜及液-固色譜。由高壓輸液泵、進樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與液相柱色譜裝置比較,具有GX、快速、靈敏等特點。
1、分離分析藥物的組合含量:
由于一種藥劑常含有多組分,液相色譜儀是既能分離又能定量的儀器。如脂溶性維生素片,含有鉻維生素,有C18柱及含1%碳酸銨的甲醇為流動相。一次即可將各維生素B6、D1、A、E同時分離并定出含量。又如止痛藥或退燒藥也可用此法分離并測得各組分的含量。
2、藥物生產(chǎn)中進行中間控制:
生產(chǎn)KJ素時,首先要了解發(fā)酵液中的主體與付產(chǎn)物的存在情況。例如:青霉素、四環(huán)素、頭孢子菌素、紅霉素、柔紅霉素、慶大霉素等的發(fā)酵產(chǎn)物,均可用C18柱和甲醇及緩沖液配制的流動相或用離子對法,分析主體及其收產(chǎn)物的含量。液相色譜儀對普魯卡因酰胺、茶堿等可進行主體含量的測定,對硝酸甘油可測定主體含量及其降解產(chǎn)物,以便保證藥物的熱量。

3、分析藥物在體內(nèi)的殘量:
這是近來研究新藥效能很主要的內(nèi)容之一,如冬凌草甲素是植物中的一組分,有效果,但是毒性大。測定其在血清中含量很重要,現(xiàn)在可用C18柱及甲醇水為流動相,測定處理后的血清樣品,即可得到血中的含量。如磺胺類藥品在血清及尿中含量也不允許太大,可用C18柱及酸性乙醇為流動相,液相色譜儀測定含量后,則可估計Z合適的用藥劑量。又如四環(huán)素、酸、止痛藥、退燒藥、護糖尿病的藥物等,在血或尿中的含量都可用C18柱用甲醇、水為流動相來測定含量。因此,反相色譜法應用范圍極廣。
4、測定藥物在各種器官中的代謝產(chǎn)物:
特別是研究藥物的代謝產(chǎn)物在血清中存在的情況,如液相色譜儀測血清中的酮酸及戊二酸,測尿中代謝產(chǎn)物更為方便,不需要繁鎖的預處理。因為研究尿中的組分能鑒別病人的代謝功能,對病理研究或監(jiān)床診斷均具有重要的參考價值。
液相色譜儀在生化方面主要方向是分析嘌呤、嘧啶基的核甙或核甙酸及具有相應的肽和蛋白質(zhì)。
1、分析核酸
近年來有關分析核酸的研究很多,主要是分離RNA、DNA及碎片?,F(xiàn)在液相色譜儀使用硅烷化的硅藻土或長碳鏈季胺鹽涂漬在上面制成系列填充柱。已能分離t-RNA、r-RNA及DNV碎片。有沒的緩沖液淋洗,還可利用此技術做RNA碎片的序列分離制備工具,對生物研究起了重要的作用。
2、氨基酸、肽、蛋白質(zhì)的分析
氨基酸分析主要是制成熒光衍生物或酰氯的衍生物,然后測定其序列。近來也可用液相色譜的柱后衍生物法測定其序列。操作簡便、速度快、深受歡迎。用四烷基氯化胺肽形成離子對或GX凝膠色譜測定蛋白質(zhì),其分離效果也很好。
3、酶的分析
酶是在血清及其他生理樣品中常有的反應產(chǎn)物,化學分析法操作不便,易造成誤差,用液相色譜儀分析,具有操作簡便、快速、準確的特點。如測定堿性或酸性磷酸酶的含量,測定反應產(chǎn)物中腺甙脫胺酶的含量等,目前對酶用色譜法分離分析的研究工作已開展很多。
4、糖的分析
糖的分析是其它方法較難完成的。如把糖與硼酸緩沖液預選混合,使生成糖-硼酸絡合離子,再進行分離??砂颜崛樘?、阿蘆糖、果糖、阿拉伯糖、巖藻糖、半乳糖、山梨糖、木糖、葡萄糖等幾十種,全部分開。也可用胺基柱分離各種天然產(chǎn)物中伯糖的各繃分。
天然物的組分非常復雜,如中草藥中各組分含量多少對藥劑作用影響很大。用液相色譜儀分析,具有簡便、快速的特點。氨基柱能分離分析天然物中糖的組分。氰基柱能分離中藥紫草及其衍生物的組成。硅膠柱能測定成藥中馬錢了堿、苦堿等含量。C18柱分離丹參中主要組分兒茶酚、桂皮中桂皮酸、煙草中的酚類化合物、麥角或鴉 片中各種植物堿,這些都是近來日益受到重視的結果。
以植提行業(yè)為例,涉及的成分大致可分為以下幾大類:
?、偕飰A類:即植物堿,一種堿性含氮有機化合物,有顯著的生物活性或毒性,是中草藥重要的有效成分。
?、邳S酮類:黃酮類化合物廣泛存在于植物的各個部位,尤其是花、葉部位,約20%的中草藥中都含有黃酮類化合物,資源豐富。
?、鄱嗵穷?大于10個單糖組成的多糖化合物。如淀粉、纖維素。
?、苘疹?糖與一種物質(zhì)(酚類、黃酮類)結合而成的物質(zhì)。
?、萦袡C酸類。
?、薨l(fā)油類:具有揮發(fā)性,可隨水蒸汽蒸餾出來的油狀液體,大部分具有香氣。
該行業(yè)均有使用到液相(分析成分,含量),氣相(分析成分,含量,農(nóng)殘)及質(zhì)譜等儀器的潛力,但不同規(guī)模的企業(yè)對儀器的需求差別很大。
分析食品或動物飼料中的嘌維生素含量,是當前食品工業(yè)中的重要課題。分析食品中的黃曲 霉素及各種香料,又是生產(chǎn)中的常用課題。如今液相色譜儀已在分析咖啡中的黃嘌泠、調(diào)料中的核甙酸及核甙、果汁中的有機酸、米中的維生素、牛奶中的維生素D等都對食品營養(yǎng)價值提供有效數(shù)據(jù)。液相色譜儀能分析食品中的有毒成分,如蘋果中農(nóng)藥萘乙酸、牛奶中的硝基呋喃腙、食品添加劑石臘油中的苯并芘、稻米中的黃曲 霉素、魚體中的有機汞等。

液相色譜儀主要針對大氣中污染的成分分析,廢水和汽車尾氣中有害組分的分析。如柴油機排出的顆粒,用有機溶劑溶解后,經(jīng)色譜分析結果,有多環(huán)芳烴的硝基物,這是對人體健康有很大潛在危險的化合物。又如藥廠排出的廢水中有大量硝酚、斯蒂芬酸;染料廠排出廢水中的苯胺等。用液相色譜分析簡便迅速。
農(nóng)業(yè)中需要對各種作物中的營養(yǎng)成分進行各種含量分析。而液相色譜儀對多糖、脂肪酸蛋白質(zhì)等分析都是極為有效的設備,因此應用頗為廣泛。
1、表面活性劑的分析
表面活性是工業(yè)產(chǎn)品中常用的一種原料,其純度與結構應用性能有密切關系,液相色譜儀的分離有獨特的效果。如C18柱及甲醇、水為流動相測定非離子表面活性劑時,可得到其純度、分子量大小及添加劑巰基苯并噻唑,也可分離聚乙二醇及吐溫系列物等。
2、染料及其中間體的分析
染料中異構物很多,大大影響了染料的色澤。通過分析,了解情況即可在工藝中采取有效措施。如磺酸類染料中間體,可用C18柱及含鹽甲醇為流動相分析。蒽醌類中間體用C18柱及甲醇、水系為流動相。苯胺系列用硅膠柱及含醇環(huán)已烷來分離等方法,都很有效。
3、有機酸含量分析
沼氣發(fā)酵液、果汁、紅茶菌、油廠廢液等均含有各種有機酸,可用離子交換柱及緩沖液為流動相,都能得到好的分離效果。
4、聚合物單體的質(zhì)量分析
雙酚A是環(huán)氧樹脂、聚砜、聚碳酸脂的原料,其質(zhì)量的好壞與聚合物質(zhì)量有密切關系,其中以所含異丙烯基苯酚的含量影響Z壞,可須知硅膠柱及氯仿流動相分析其含量,然后在工藝中除去。各種醛、酮的二硝基苯腙衍生物,各種烷基酚,羥苛酷酚等均可用液相色譜儀分離。
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