凝膠成像系統是實驗室里Z為常用的儀器之一,包括成像系統和分析凝膠圖片的軟件系統。在選購凝膠成像系統時需要分別從這兩個部分來考察凝膠成像系統的功能參數,擁有一臺好的、運行穩(wěn)定的設備是實驗者的心愿。
市場上凝膠成像系統林林種種,但是從成像原理上可以分成兩大類,分別是拍照成像和掃描成像。
拍照成像選購要素:
拍照成像簡單說就是樣品和相機的相對位置不動,可以進行單次成像或多次成像。拍照成像目前主要采用CCD相機成像,由于可以設置不同的曝光時間,常被用來進行微弱的化學發(fā)光及生物發(fā)光的成像。
如果主要用凝膠成像系統來拍普通核酸膠或蛋白膠,那么幾乎市場上所有的凝膠成像系統都可以很好的滿足需求。這時除了價格這個決定因素外,能比較的也就是一些操作等不太重要的指標了。但是對于準備做化學發(fā)光的用戶,對敏感度要求高,同時還要求比較寬的動態(tài)范圍。因為要想捕獲到微弱的化學發(fā)光,需要上佳的CCD相機和鏡頭。
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一般來說,CCD相機的冷卻溫度和背景噪音息息相關,溫度越低,噪音就越低。因此,-25℃的制冷溫度是對相機的diyi個要求(更低的溫度,噪音降低效果不明顯,而量子效率又會受很大影響);另外,較大的像素能夠提供更高的捕光效率;所以對于相同大小的CCD芯片,需要注意像素的尺寸。
鏡頭的參數就簡單了,由于只需要觀察近距離的樣品,而且一般可以調整樣品位置,所以基本無需選擇長鏡頭或者變焦鏡頭;但是,由于需要檢測微弱的化學發(fā)光,鏡頭的光圈則至關重要,一般F值越小,其通光量越大,而且成平方反比關系,因此一般需要選擇光圈F值盡量小的鏡頭。
另外,如果鏡頭是電動的,可以省卻打開機箱,反復手工調整光圈和聚焦等的煩惱。其他需要考慮的包括光源、濾光片和暗箱等部件。光源的種類和發(fā)光的均一度,濾光片的數量和暗箱的遮光效果等均在考慮范圍之內。
掃描成像選購要素:
掃描成像是相機對樣品進行局部成像,然后通過樣品或相機的移動對整個樣品進行成像。掃描成像由于精度高、重復性好被廣泛用于大型樣品以及多通道凝膠成像系統中。可以說,對于大型樣品或多通道凝膠成像系統應用,能選擇掃描成像的,盡量不要選擇拍照成像。
凝膠成像系統掃描成像的靈敏度一般不是考慮要素,Z關注的應該是分辨率,當然分辨率只要達到要求即可,對于小型的凝膠、膜和微孔板來說,一般分辨率在25um左右應該是足夠了。
在滿足分辨率后,還有一個更重要的參數,那就是動態(tài)范圍,簡單的說,動態(tài)范圍決定著你能否同時在一張膠上同時看到強的信號和弱的信號,而且他們之間保持比較好的定量關系。一般動態(tài)范圍采用數量級來表示,這個數越大,表明動態(tài)范圍越寬。對于激光掃描成像系統,情況就復雜一些。從激光器、濾光片到分光鏡和檢測器還有好多需要考慮和比較的。
1、核酸電泳凝膠:
一般此類凝膠都采用EB染色、紫外激發(fā),而且凝膠較小。推薦采用一般的凝膠成像系統即可完成。
2、蛋白電泳凝膠:
一般此類凝膠采用考染或銀染,白光透射成像。對于小型凝膠可以選擇一般的凝膠成像系統,但是對于大型凝膠,特別是雙向電泳凝膠,由于CCD拍照成像會有幾何扭曲,而且透鏡效應也會導致不同區(qū)域的信號強度差異,另外CCD拍照也無法保證不同凝膠的成像參數保持一致,因此掃描成像是Z好選擇。
3、轉印膜:
一般轉印膜有比色法顯色、同位素、化學發(fā)光和熒光等不同檢測手段。①比色法顯色就是產生有顏色的條帶或斑點,一般采用普通的凝膠成像系統即可。②同位素可以采用壓膠片曝光的方法,但是費時、費力而且容易過飽和。③化學發(fā)光是目前Z常用的蛋白印跡的檢測手段,冷CCD拍照成像對這種微弱的光信號是Z合適的。④熒光染料具有Z寬的動態(tài)范圍,而且還能夠提供多通路的檢測途徑(同樣適用于凝膠)。
如果需要對鄰近或重疊的目標分子進行成像,那么多通道熒光檢測是不二之選。這時掃描成像是Z佳選擇,這樣選擇不僅僅是因為掃描成像能夠帶來更高的靈敏度和分辨率,更重要的是,不同通道之間沒有幾何扭曲,擬合性好。
4、微孔板及其他特殊需求:
對于拍照成像而言,由于幾何扭曲的問題,對微孔板成像就變得比較復雜了,一般必須一個專用的校正裝置才可完成。如果凝膠成像系統采用掃描成像一般不需要任何額外附件。
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